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Häufig gestellte Fragen zu Produkten und Dienstleistungen

DNA/RNA Oligonukleotide

Products & services

Welches Oligo wird für meine Applikation empfohlen?

Selbstverständlich sollen unsere Oligonukleotide jederzeit den für Ihre Applikation notwendigen Qualitätskriterien entsprechen und pünktlich in Ihr Labor geliefert werden.

Für die häufigsten Anwendungen wie PCR, qPCR, DNA Klonierung und Sanger Sequenzierung bieten wir Ihnen optimierte und validierte Primer und Sonden unter unserer Optimised Application Oligo Kategorie an.

Finden Sie heraus welches Oligo das richtige für Sie ist!

Für alle anderen Applikationen steht Ihnen unser Customised DNA & RNA Oligo Portfolio zur Verfügung in dem Sie die Kriterien Ihrer Primer und Sonden selbst definieren können.

Wofür steht HPSF?

HPSF ist die Abkürzung für die von Eurofins Genomics entwickelte High Purity Salt Free Aufreinigung. Die Technologie ist eine Säulchenreinigung basierend auf der Flüssigkeitschromatografie.

8 Elutionschritte mit unterschiedlichen Eluenten, einschließlich einer sauren Abspaltung der Dimethoxytrityl (DMT) Schutzgruppe, garantieren, dass nahezu alle n-x Produkte, alle Schutzgruppen und Salze aus dem Rohprodukt vollständig entfernt werden.

Der HPSF Prozess basiert auf einer parallelen Aufreinigung von 96 Oligos. Eine Vielzahl von HPSF Robotern ermöglicht eine Hochdurchsatzaufreinigung von mehreren tausend Oligos pro Tag.

Welche Qualitätskontrollen werden durchgeführt?

OD Messung

Die finale Ausbeute eines Oligos wird über die Messung der optischen Dichte (OD Wert) bestimmt. Der OD260 Wert (optische Dichte) einer DNA entspricht der Menge an DNA, die einen Absorptionswert von 1.0 bei einer Wellenlänge von 260 nm ergibt. Dies wird anhand einer in 1.0 ml ddH20 gelösten DNA-Probe in einer 1cm Quarzküvette über einen Reader ermittelt. 1 OD260 entspricht, abhängig vom GC Gehalt, ungefähr 33 µg/ml einer Einzelstrang DNA.

MALDI-TOF MS

Um die Identität und die qualitative Reinheit jedes synthetisierten Oligonukleotids zu gewährleisten, verwendet Eurofins Genomics die neueste Gerätegeneration für die MALDI-TOF Massenspektroskopie (Matrix Assisted Laser Desorption Ionisation – Time of Flight). Durch den hohen Grad an Automatisierung und der Verwendung einer speziell entwickelten Analysesoftware ist es uns möglich, die Auslieferung von ausschließlich hochqualitativen Oligonukleotiden sicher zu stellen. Ein Qualitätsreport mit den MALDI-TOF MS Spektren ist für alle 5-60mer Oligonukleotide zusammen mit dem Synthese Report und Lieferschein entweder online zum eigenen Download oder als Ausdruck erhältlich.

Kapillar Gel-Elekrophorese (CGE)

Die CGE ist eine erfolgreiche Methode um die quantitative Reinheit eines Oligos zu kontrollieren und eine alternative Lösung zu einer MALDI-TOF MS Analyse für lange Oligos. Eine Kapillar Gel-Elekrophorese wird bei uns für RP-HPLC oder HYPUR gereinigte, unmodifizierte Oligos mit einer Länge von über 60 Basen durchgeführt. Ein Qualitätsreport mit den CGE Spektren ist für diese Oligos zusammen mit dem Synthese Report und Lieferschein entweder online zum eigenen Download oder als Ausdruck erhältlich

How to order

Wie kann ich meine Oligos bestellen?

Wir empfehlen grundsätzlich über unser Ecommerce System Online zu bestellen. Dies ist die einfachste und sicherste Art und Sie profitieren von vielen weiteren Vorteilen wie z.B. der Auftragsverfolgung, Bestellhistorie und archivierten Dokumenten.

Sollten Sie keine Möglichkeit haben, Online zu bestellen, dann verwenden Sie bitte die Bestellformulare auf unserer Website und senden diese per E-Mail an orderbox-eu@eurofins.com.

Kann ich Excel-Files online hochladen?

Ja, können Sie.

Es können Oligos ohne ein bestimmtes Dokumentenformat als .xls auf jeder Oligo-Bestellseite hochgeladen werden.

Lediglich die Oligonamen und die Oligosequenzen müssen mit der entsprechenden Überschrift „oligoname“ und „sequence“ versehen werden (siehe Example).

Die Namen der Oligos dürfen aus maximal 16 Zeichen bestehen. Bei Plattenbestellungen ist zusätzlich die Well-Position unter der Überschrift „plate pos.“ anzugeben. Um Ihre Oligos in den Warenkorb zu transferieren, klicken Sie einfach nach dem Hochladen der Liste auf „Save“.

Wie bestelle ich degenerierte Basen bzw. Wobbles?

Eine Mischung von verschiedenen Basen an einer Position wird als Wobble bezeichnet. Um eine solche Base zu definieren, nutzen Sie bitte unten aufgeführten IUPAC Codes. Die entsprechenden Buchstaben der Wobbles können Sie direkt in die Oligossequenz einfügen:

M R W S Y K V H D B N
AC AG AT GC CT GT AGC ACT AGT GCT AGCT


Bei der Bestellung eines Wobbles werden für die Synthese die verschiedenen Basen zu gleichen Mengen eingesetzt. Allerdings kann es sein, dass nicht alle Nukleoside zu gleichen Anteilen in das Oligonukleotid eingebaut werden.

Neben einer normalen degenerierten Base (z. B. Y (CT) 50:50) können wir auch definierte Mengenverhältnisse mischen (z. B. CT 30:70). Diese definierten Wobbles können Sie bestellen, indem Sie in dem Drop-down Menü “Wobble defined ratio” unter “Internal Modifications” in der Ecom Orderform anwählen. Das gewünschte Mengenverhältnis geben Sie bitte in dem Kommentarfeld an (z. B.: A:C= 30:70).

Wie bestelle ich Oligos mit Phosphorthioat (PTOs)?

In dem Ecommerce Bestellsystem finden Sie unter dem „Customised DNA Oligos“ Menü eine gesonderte Bestellseite für PTO Oligos. Um die PTO-Bindung zu spezifizieren, verwenden Sie bitte die Groß- und Kleinschreibung. Großbuchstaben stehen für Phosphodiester- und Kleinbuchstaben für PTO- Bindungen. z. B.: "TTTaGCTCaCTCgTTcAA" oder für ein komplettes PTO "atcgatcgatcgtcgatc".

Für jeweils 2 PTO Bindungen am 5’ und 3’ Ende ist folgende Eingabe (5’->3’) notwendig "agCTCTGCGCAACGTCGacg“.

Bei E-Mail oder Fax-Bestellungen können Sie die Sequenz in gleicher Weise angeben.
Bitte vermerken Sie aber zusätzlich, dass Kleinbuchstaben Phosphorthioat-Basen darstellen.

Kann ich modifizierte RNA bestellen?

Ja. Bitte verwenden Sie hiefür die Bestellseite „Modified RNA Oligos“ im Menü „RNA Oligos“ in unserem Ecommerce Bestellsystem. Hier können Sie die gewünschten 3’- oder 5’ Modifikationen auswählen.

Wie bestelle ich Chimäre Oligos?

Verwenden Sie hierfür die Ecom-Bestellseite „Chimeric Oligos“ im Menü „RNA Oligos“.

Um die Sequenz des Chimären Oligos zu spezifizieren, verwenden Sie bitte

  • Großbuchstaben für Phosphodiester (DNA)
  • Kleinbuchstaben für PTO- Bindungen
  • Basen mit 2'O-Methyl RNA werden mit eckigen Klammern [...] dargestellt
  • RNA Basen in der Sequenz mit runden Klammern () gekennzeichnet

Beispiel: ATC(AUG)gtg[ACG]
Base 1-3 sind DNA Basen mit Phosphordiester-Bindungen
Base 4-6 sind RNA Basen
Base 7-9 sind DNA Basen mit PTO Bindungen
Base 10-12 sind 2'O-Methyl RNA Basen

Nach Bestätigung Ihrer Eingabe wird Ihnen zur Kontrolle Ihre Oligosequenz farbig sowie mit allen physikalischen Parametern nochmals dargestellt.

Wie kann ich eine Bestellung abändern oder stornieren?

Oligo Bestellungen können in der Regel noch innerhalb von 30 Minuten nach Bestelleingang annulliert werden. Zu einem späteren Zeitpunkt ist dies nicht mehr möglich, da wir unmittelbar mit den Synthesen starten, um schnelle Lieferzeiten gewährleisten zu können. Wenn Sie unser Ecommerce System nutzen, können Sie Bestellungen eigenhändig stornieren. Gehen Sie dazu bitte auf “my orders“ und dann auf den Link “cancel order”. Beachten Sie, dass der Link “cancel order” nur ca. 20 Minuten lang erscheint.
Alternativ können Sie unser Customer Support Team (+49 8092 8289-77) während unserer Geschäftszeiten kontaktieren.

Wie kann ich den Status meines Auftrags verfolgen?

Wenn Sie unser Ecommerce Bestellsystem nutzen, können Sie den Status Ihrer Bestellung direkt in Ihrem online Account verfolgen. Gehen Sie dazu bitte auf „my orders“ > „track oligos“. Bei Oligo Bestellungen können Sie auch Ihre DHL Lieferung verfolgen, sobald der Auftrag verschickt wurde. Diese Funktion können Sie mit dem Button “Tracking of this delivery” aufrufen.

Wenn Sie Ihre Oligonukleotide mittels E-Mail oder Fax bestellt haben, erhalten Sie, sofern Sie eine E-Mail Adresse angegeben haben, eine Auftragsbestätigung per E-Mail . In dieser E-Mail ist ein Link aufgeführt mit dem Sie jederzeit den aktuellen Status Ihrer Bestellung einsehen können. Sobald der Auftrag versandfertig ist, erscheint ein zusätzlicher DHL Link, mit dem Sie Ihre DHL Sendung verfolgen können.

Bitte beachten Sie, dass alle Päckchen erst gegen Abend abgeholt werden. Trotz vorhandener Tracking Nummer ist eine Sendungsverfolgung vor diesem Zeitpunkt nicht möglich.

General technical questions

Wie werden Oligos bei Eurofins Genomics synthetisiert?

Oligos werden auf verschiedenen Synthesizern mittels Phosphoramiditchemie produziert. (Caruthers, M.H. (1983) Tetrahedron Lett. 24:245-248).
Die Oligonukleotide werden vom 3’- zum 5’-Ende hin synthetisiert während sie an einer Festphase kovalent gebunden sind (Festphasen Synthese). Die Bausteine für die DNA Synthese sind DNA Phosphoramidit Nukleoside, die mit unterschiedlichsten Schutzgruppen versehen sind.

synthesis cycle

Die Synthese startet mit „Deblocking“ (A), d.h. mit der Abspaltung der 5’ Dimethoxytrityl-Schutzgruppe.

Ein aktiviertes Phosphoramidit Nukleosid koppelt an die freie 5’ Hydroxylgruppe (B). Die Kopplungseffizienz liegt üblicherweise zwischen 98% und 99,5%. Da die Kopplungseffizienz keine 100 % beträgt, wird bei jedem Kopplungsschritt ein kleiner Prozentsatz an verkürzten Sequenzen mit produziert.

Wenn man solche Fehlsequenzen weiter reagieren lassen würde, würden ungewünschte Mutanten entstehen. Dieses Problem wird umgangen, indem die restlichen freien 5’ Hydroxylgruppen durch Acetylierung (C: Capping) inaktiviert werden.
Bei manchen Molekülen schlägt das Capping fehl. Diese nehmen so an weiteren Synthesezyklen teil, die dann zu fast vollständigen Molekülen mit internen Deletionen wachsen – die (n-x) Produkte.

Nach der Kopplung werden die DNA-Basen durch ein instabiles Phosphit Triester gebunden. Diese werden durch einen Oxidationsschritt (D) zu einer stabilen Phosphotriester Verbindung umgewandelt.
Der Oxidationsschritt vollendet einen Oligosynthesezyklus. Die DNA-Synthese kann durch das erneute Abspalten der DMT Gruppe am 5´-Ende der Kette fortgesetzt und ein neuer Zyklus gestartet werden.

Das Abspalten von der Festphase und das Entschützen der Oligonukleotide erfolgt unter basischen Bedingungen.

Hat die Oligosequenz Einfluss auf den Erfolg einer Synthese?

Eurofins Genomics verfügt über eine jahrelange Erfahrung in der Synthese von Oligonukleotiden. Gelegentlich kommt es vor, dass Oligos aufgrund Ihrer Sequenz schwer zu synthetisieren sind, z. B. können Oligos mit einem hohem “G” Anteil („G-Stretches“) in der Synthese Schwierigkeiten bereiten. Zudem haben Oligos mit vier oder mehr aufeinanderfolgenden „Gs“ die Eigenschaft zu akkumulieren und einen „Guanin-Tetraplex“ zu bilden (Poon and MacGregor (1998) Biopolymers 45:427-434). Oligos mit selbst-komplementären Sequenzen tendieren dazu, Aggregate zu bilden, welche die HPSF, HPLC, und HYPUR Aufreinigung erschweren.

Was ist Synthese Maßstab und Synthese Ausbeute?

Der Synthese Maßstab bezeichnet die Menge an eingesetzem Startmaterial (CPG) bei der Festphasensynthese.

Dies ist nicht zu verwechseln mit der Synthese-Ausbeute, die von der Kopplungseffizienz während der Synthese abhängt.

Die Kopplungseffizienz ist wiederum stark von der Qualität der einzusetzenden Rohstoffe abhängig. Die Sequenz eines Oligos beeinflusst ebenfalls die Kopplungseffizienz und somit die Synthese-Ausbeute, wie die folgende Tabelle zeigt:

 Yield
CE 99.5%
Yield
CE 99.0%
Yield
CE 98.5%
20mer 91 83 75
30mer 86 75 65
40mer 82 68 55
60mer 74 55 41
100mer 61 37 22

Theoretische Ausbeute des Volllängenprodukts = Kopplungseffizienz (CE)

Wofür steht “OD”?

Der OD260 Wert (optische Dichte) einer DNA entspricht der Menge an DNA, die einen Absorptionswert von 1.0 bei einer Wellenlänge von 260 nm ergibt. Dies wird anhand einer in 1.0 ml ddH20 gelösten DNA-Probe in einer 1cm Quarzküvette über einen Reader ermittelt.
1 OD260 entspricht ungefähr 33 µg/ml einer Einzelstrang-DNA.

Warum sind Ausbeuten oft nicht reproduzierbar?

Es gibt viele Faktoren, die die Ausbeute beeinflussen können. Vorallem liegt es an der Oligolänge und an der Sequenz selbst (Basenkomposition).

Einer der Hauptgründe warum für das gleiche Oligo verschiedene Ausbeuten entstehen können, ist das Befüllen und Beladung der Synthesesäule mit CPG (controlled pore glass) Material, das für den Start der Synthese gebraucht wird. Die Mindestmenge an verwendetem CPG Material bezieht sich auf den Synthesemaßstab. Da aber Mengenschwankungen beim Befüllen nicht auszuschließen sind, kann es zu unterschiedlichen Ausbeuten kommen.

Wie lange sind unmodifizierte Oligos haltbar und wie sollten sie gelagert werden?

Unsere Stabilitätsstudien zeigen, dass unmodifizierte Oligos mehr als 6 Jahre stabil sind ,wenn man sie bei -20°C im lyophilisiertem Zustand lagert:

oligo stability table de

Die Stabilitätsstudie wurde mittels analytischer HPLC und MALDI-TOF MS sowie mittels DNA Sequenzierung durchgeführt.

Wenn Sie Ihre Oligos in sterilem Wasser oder in Puffer gelöst haben, oder Sie die Oligos bereits in dieser Form erhalten haben, empfehlen wir, die Oligos zu aliquotieren, die Aliquots zu lyophilisieren und bei mindestens -20°C zu lagern.

Um mehrfaches Einfrieren und Auftauen der Oligos zu vermeiden, sollten die Oligos, die gerade verwendet werden, bei +4°C im Kühlschrank aufbewahrt werden.

Wie lange sind Oligos im Allgemeinen haltbar?

Die Haltbarkeitszeit von Oligos wird von 3 Faktoren bestimmt:

1. PH-Sensitivität
Im Gegensatz zur doppelsträngigen DNA sind Einzelstrang Oligos empfindlicher gegenüber sauren pH-Werten. Daher sollte das Medium, das zum Lösen des Oligonukleotids verwendet wird, in einem basischen pH-Bereich liegen.

2. Nuklease-Abbau
Oligonukleotide können durch Nuklease-Aktivitäten degradieren. Dieser Nuklease-Abbau wird durch die Anwesenheit von Salz – insbesondere bei 2- wertigen und 3- wertigen Ionen – beschleunigt. Um die Aktivität von Nukleasen zu blockieren, können geeignete Hygienemaßnahmen am Arbeitsplatz sowie die Zugabe von geringen Mengen von Ethylendiamintetraessigsäure (EDTA) helfen.

3. Empfindlichkeit gegenüber Einfrieren und Auftauen
Die Qualität von Oligonukleotiden kann durch mehrfaches Einfrieren und Auftauen beeinträchtigt werden. Um dies zu vermeiden, empfiehlt es sich, diesen Prozess auf ein Minimum zu beschränken. Daher empfehlen wir die Oligos zu aliquotieren, die Aliquots zu lyophilisieren und bei mindestens -20°C zu lagern.

Wie kann die Haltbarkeit von Oligos optimiert werden?

Empfohlener Lösungspuffer

Für die Herstellung der Stammlösung empfehlen wir 10 mM Tris-EDTA; pH 8.0.
Die Arbeitslösung empfehlen wir mit Tris-Puffer zu verdünnen. Dadurch wird die Konzentration von EDTA, das bei enzymatischen Reaktionen stören kann, herabgesetzt.

Die Pufferkonzentration sollte der entsprechenden Oligomenge angepasst werden, da die DNA selbst bereits einen relativ hohen Säuregehalt besitzt. Der o.g. Puffer entspricht den Puffersystemen, die für molekularbiologische Applikationen wie PCR oder Sequenzierung empfohlen werden.

Salt Free und HPSF Oligonukleotide sollten nicht ungepuffert in destilliertem Wasser gelöst werden, da durch die nicht vorhandenen Salze, die diese Oligos mit sich bringen, keine eigene Pufferwirkung erzielt wird.
Zusätzlich empfehlen wir die Qualität des destilliertem Wassers, das für die Herstellung des Puffers verwendet wird, regelmäßig zu überprüfen.

Vermeidung von mehrfachem Auftauen und Einfrieren

Nach dem Lösen mit Tris-EDTA, sollten Oligonukleotide aliquotiert und bei -20°C gelagert werden. Einzelne Aliquots können auch in flüssiger Form bei +4°C im Kühlschrank aufbewahrt werden, wenn diese innerhalb von 1 bis 2 Tagen aufgebraucht werden.
Falls eine längere Aufbewahrungszeit (>6 Monate) nötig ist, empfehlen wir die Oligos im lyophilisiertem Zustand bei -80°C einzufrieren, um enzymatische Aktivitäten auszuschließen.
Nach unserer Erfahrung können Oligos, je nach Eigenschaft und in Abhängigkeit der Applikation, zwischen 1 Monat und 2 Jahren aufbewahrt werden.

Wie wähle ich die passende Farbstoffmarkierung?

Wird ein neuer Assay entwickelt, tritt meistens die Frage nach der bestmöglichen Fluoreszenzmarkierung auf. Die optimale Wahl lässt sich anhand der spektralen Eigenschaften jedes einzelnen Fluoreszenzfarbstoffes in Verbindung mit dem zu verwendenden Instrument treffen.

Jedes Gerät ist durch spezifischen Ausstattungsmerkmale gekennzeichnet, die es zu berücksichtigen gilt. Beispielsweise spielen die Energiequelle, optische Filter oder die Empfindlichkeit eine Rolle.

Welches sind die wichtigsten Eigenschaften, die geprüft werden sollten, um den passenden Farbstoff zu wählen? Hier sind Absorptions- und Emissionsspektren, der Stokes-Shift, der Extinktionskoeffizient, die pH- Sensitivität, die Stabilität gegenüber Photobleaching sowie die Quantenausbeute der Farbstoffe zu nennen.

Welche Kriterien sind bei der Auswahl des richtigen Farbstoffes zu beachten?

Absorptions- und Emissionsspektren von Farbstoffen
Der Absorptionswert gibt an, bei welcher Wellenlänge ein Farbstoff am stärksten sichtbares Licht oder UV-Licht absorbiert. Der Emissionswert gibt an bei welcher Wellenlänge eine Modifikation Licht bzw. Strahlung abgibt. Jede Farbstoffmodifikation hat seinen eigenen Absorptions- und Emissionswert (siehe Tabelle). Welches Absorptions- bzw. Emissionsspektrum eines Farbstoffes benötigt wird hängt von der Anwendung bzw. von der Art des Gerätes ab.

Stokes-Shift
Der Stokes-Shift ist die Differenz der Wellenlängen zwischen der absorbierten und der emittierten Fluoreszenzsignale. In der Regel ist ein großer Stokes-Shift erstrebenswert, da es bei der Verwendung von optischen Filtern einfacher ist, anregendes Licht und die Fluoreszenzemission voneinander zu trennen.

Extinktionskoeffizient
Dieser Wert beschreibt die Fähigkeit des Farbstoffs, Licht zu absorbieren. Die Absorbtionsfähigkeit hat einen eindeutigen Effekt auf die Menge an Licht, die der Farbstoff emittieren kann.

pH-Sensitivität
Manche Fluoreszenzfarbstoffe sind äußerst empfindlich gegenüber basischen oder sauren pH-Werten. Im alkalischen Bereich über pH 9 können bestimmte Farbstoffmoleküle degradieren. Andere Fluophore sind sowohl im sauren als auch im basischen pH-Bereich stabil. Eine der Ursachen dafür sind die strukturellen Gegebenheiten der Moleküle.

Stabilität gegenüber Photo Bleaching
Photobleaching sagt, dass bestimmte Farbstoffmoleküle unter ständiger Laserbestrahlung zerstört werden und ein Verlust der Fluoreszenz beobachtet werden kann. Durch den Verlust der Farbstoffintensität bzw. der Quantenausbeute können Experimente falsche Aussagen liefern.

Allerdings sollte auch das verwendete Gerät und die Art der Anwendung bei der Auswahl von Modifikationen berücksichtigt werden.

Die Stabilität gegenüber Photobleaching ist z. B. bei der DNA-Sequenzierung und in der Durchfluss-Cytometrie weniger wichtig als bei der Fluoreszenzmikroskopie.

Fluoreszenz-Quantenausbeute
Die Quantenausbeute (auch Quanteneffizienz genannt) beschreibt das Verhältnis zwischen der Anzahl von Prozessen, die durch Absorption von Photonen ausgelöst werden und der Anzahl der absorbierten Photonen selbst. In der Fluoreszenz gibt die Quantenausbeute eines Fluorophors das Verhältnis zwischen der Anzahl der emittierten und absorbierten Photonen an. In der Regel ist die maximale Quantenausbeute 1.0 (100%).

Die Quantenausbeute von Fluoreszenzfarbstoffen hängt stark von der jeweils existierenden Mikroumgebung ab. Z.B die des pH-werts, der Art der Lösung, Konzentration oder der Temperatur. Daher kann keine spezifische Quantenausbeute für einzelne Fluoreszenzfarbstoffe angegeben werden.

Kann ich unterschiedliche Modifikationen in einem einzelnen Oligo bestellen?

Wir bieten mehr als 100 unterschiedliche Modifikationen an.
Mehrere Kopplungen derselben Modifikation oder eine Mischung aus verschiedenen Modifikationen sind in einer einzelnen Oligosequenz möglich. Der Großteil der modifizierten Oligonukleotide wird mit kommerziell erhältlichen Phosphoramiditreagenzien hergestellt. Die Kopplungseffizienz und somit die Ausbeute dieser Phosphoramidite ist meist geringer als bei den normalen Nukleosid Phosphoramiditen. Je höher die Anzahl an Modifikationen und Modifikationskombinationen in einem Oligo und je länger die Oligosequenz ist, desto komplexer wird die Synthese und die Aufreinigung des Oligos.

Bitte kontaktieren Sie unser Customer Support Team, falls Sie Hilfe zur Bestellung von mehrfach modifizierten Oligos benötigen.

Kann ich unterschiedliche Backbone-Modifikationen in einem einzelnen Oligo bestellen?

Ja, jede Anzahl und Kombination von DNA und Phosphorthioat Bindungen (PTO) ist möglich.

Wie sollten Oligos mit Fluoreszenzfarbstoffen gelagert werden?

Für die Herstellung der Stammlösung empfehlen wir eine 10 mM Tris-HCl, pH 8.0, 1 mM EDTA Pufferlösung.

Bitte beachten Sie, dass Oligonukleotide, die mit einem CY-Farbstoff markiert sind, bei pH 7.0 stabil sind. Ein höherer pH-Wert würde dem Farbstoff schaden.

Die Arbeitslösung empfehlen wir mit Tris-Puffer zu verdünnen. Dadurch wird die Konzentration von EDTA, das bei enzymatischen Reaktionen stören kann, herabgesetzt.

Wir empfehlen die Oligos lyophilisiert bei mindestens -20°C zu lagern.
Wenn Sie Ihre Oligos in Puffer gelöst oder Sie die Oligos bereits in dieser Form erhalten haben, empfehlen wir die Oligos zu aliquotieren, die Aliquots zu lyophilisieren und bei mindestens -20°C zu lagern.

Um mehrfaches Einfrieren und Auftauen der Oligos zu vermeiden, sollten die Oligos, die gerade verwendet werden, bei +4°C im Kühlschrank aufbewahrt werden.
Zusätzlich empfehlen wir, farbstoffmarkierte Oligos grundsätzlich im Dunklen zu lagern und sie so wenig wie möglich dem Licht auszusetzen.

Wie sollten Oligos in Tubes und/oder Platten gelöst werden?

Für die Herstellung der Stammlösung empfehlen wir 10 mM Tris-EDTA; pH 8.0.
Die Arbeitslösung empfehlen wir mit Tris-Puffer zu verdünnen. Dadurch wird die Konzentration von EDTA, das bei enzymatischen Reaktionen stören kann, herabgesetzt.

Salt Free und HPSF Oligonukleotide sollten nicht ungepuffert in destilliertem Wasser gelöst werden, da durch die nicht vorhandenen Salze in diesen Oligos keine eigene Pufferwirkung erzielt wird.

Zusätzlich empfehlen wir die Qualität des destilliertem Wassers, das für die Herstellung des Puffers verwendet wird, regelmäßig zu überprüfen.

Die Standardkonzentration für Stammlösungen beträgt 100 µM. Sie finden die entsprechenden Angaben zum Lösungsvolumen auf unserem Synthesereport, der schon vor dem Eintreffen Ihrer Oligos in Ihrem Online-Account erhältlich ist.

In unserem Ecom System steht Ihnen zusätzlich ein kostenfreies Online-Tool (MOPS) zur Berechnung von Oligo Verdünnungen zur Verfügung.

Wie werden komplementäre Oligos annealed?

1. Lösen Sie die lyophilisierten Oligos in Wasser oder TE und verwenden Sie die Konzentration die auf den Oligo Synthesereports angegeben ist.


2. Addieren Sie folgende Komponenten:

Stock                                 Endkonzentration
Oligonukleotid 1                   100 nmole/ml
Oligonukleotid 2                   100 nmole/ml
10x Annealing-Puffer*           1x
Nucleasefreies Wasser         bis zu entsprechendem Volumen

*10x Annealing-Puffer: 100 mM Tris-HCI, pH 7.5,1 M NaCI and 10 mM EDTA.


3. Erhitzen Sie die Oligo-Lösung bis zu einer Temperatur, die 10°C höher ist als die berechnete Schmelztemperatur. Halten Sie diese Temperatur für 10 Minuten. Nehmen Sie die Lösung von der Heizplatte bzw. aus dem Wasserbad und lassen Sie diese langsam bis zur Raumtemperatur für ca. 1 Stunde auf dem Labortisch herunterkühlen.

Lagern Sie anschließend die annealten Oligos bei -20°C.

Wie sollen Thiol-Oligos behandelt werden?

Wir empfehlen das Thiol vor Verwendung des Oligos in Ihrer Applikation zu reduzieren:

1. Geben Sie dazu 200 µl 10mM TCEP (2,9mg TCEP-HCL in 1ml 1xTE Puffer, pH 8.0) auf Ihr Oligo

2. Schütteln Sie es 60 min bei Raumtemperatur

3. Fällen Sie das Oligo:

  • Geben Sie 150 µl 3 M Na-Acetate auf die Oligolösung [24,6 g Na-Acetate + 0,21 g Mg-Acetate in 100 ml dest. H2O]
  • Füllen Sie das Tube mit Ethanol p.a.
  • Schütteln Sie das Tube vorsichtig
  • Inkubieren Sie 20 min bei –20°C

4. Zentrifugieren Sie 5 min bei 13000 rpm und verwerfen Sie den Überstand

5. Lassen Sie das Pellet bei Raumtemperatur trocknen

DNA Origami

Gibt es Softwarelösungen um DNA Origami Strukturen zu konzipieren?

Cadnano ist eine kostenloses DNA Origami Designtool. Link: http://cadnano.org.

CanDo ist eine Software zur Vorhersage der Struktur für DNA Origami Objekte. Konzeptdateien können hier analysiert werden: http://cando.dna-origami.org

Sind die Sequenzen der drei Scaffold DNA's identisch zu den Sequenzen, die in der Cadnano Software zur Verfügung stehen?

Die Sequenz der einzelsträngigen Scaffold DNA, Typ p7249 ist identisch zu der Sequenz M13mp18 in Cadnano.

Die Sequenz der einzelsträngigen Scaffold DNA, Typ p7560 ist identisch zu der Sequenz p7560 in Cadnano.

Die Sequenz der einzelsträngigen Scaffold DNA, Typ p8064 ist identisch zu der Sequenz p8064 in Cadnano.

Wie wird die einzelsträngige Scaffold DNA geliefert?

Die einzelsträngige Scaffold DNA wird in Lösung verschickt. Der Puffer enthält 10 mM TRIS-BASE und 1 mM EDTA.

Wie soll die einzelsträngige Scaffold DNA gelagert werden?

Die Lagerung für einen kurzen Zeitraum ( max. 1 Woche ) kann bei 4°C erfolgen. Für die Lanzeitlagerung empfehlen wir -20°C, und so wenig wie möglich "freeze-thaw" Zyklen.

Nach dem Auftauen sollte die Scaffold DNA vorsichtig auf- und ab pipettiert werden (homogene Lösung). Nicht vortexen.

Kann ich die einzelsträngige Scaffold DNA auch in höheren Konzentrationen erhalten?

Lösungen, die eine DNA Konzentration von mehr als 400 nM enthalten, sind sehr viskos und sind somit schwierig für die weitere Verarbeitung.

Sollte Ihre Anwendung aber eine höhere Konzentration benötigen, kontaktieren Sie uns bitte.

 

Calculations

Wie wird der Extinktionskoeffizient eines Oligos berechnet?

In unserem Ecom System steht Ihnen ein kostenfreies Online-Tool (MOPS) zur einfachen Berechnung von Extinktionskoeffizenten zur Verfügung. Der Extinktionskoeffizient bei 260 nm (e260) ist eine eindeutige physikalische Eigenschaft jedes Oligonukleotids. Definiert wird er als die gemessene Absorption bei 260 nm in einer 1 M wässrigen Lösung bei 20°C durch eine optischen Zelle mit einer Durchtrittslänge von 1 cm (Lambert-Beer`sches Gesetz).
Purin-Basen zeigen eine höhere Absorption als Pyrimidin-Basen. Interaktionen zwischen benachbarten Basen, wie auch Modifikationen, die bei 260 nm absorbieren, beeinflussen ebenfalls die optische Absorption. Somit hängt der Extinktionskoeffizient stark von der Oligosequenz und der Basenanordnung ab.

Der Extinktionskoeffizient eines Oligos kann ungefähr (Abweichungen bis zu 20% sind möglich) mit folgender Formel berechnet werden:

ε260 (mM-1 x cm-1) = (15.4 x nA) + (7.5 x nC) + (11.7 x nG) + (9.2 x nT)

15.4, 7.5, 11.7 und 9.2 entspricht dem monomeren Extinktionskoeffizient in mM-1 cm-1 gemessen bei 260 nm für dA, dC, dG und dT.

Wie wird die molare Masse N eines Oligos aus dem OD Wert berechnet?

In unserem Ecom System steht Ihnen ein kostenfreies Online-Tool (MOPS) zur einfachen Berechnung der molaren Masse zur Verfügung. Ansonsten kann folgende Formel verwendet werden:

N [nmol] = OD x 100 / 1.54 x nA + 0.75 x nC + 1.17 x nG + 0.92 x nT

n = die Anzahl des Nukleosids X


Beispiel:
Sequenz: GAA ATG AGT GCT CAT CAC TAC TTC CGC (27mer)

nA=7; nC=8; nG=5; nT=7
OD=12 (gemessen)

N [nmol] = 12 x 100 / 1.54 x 7 + 0.75 x 8 + 1.17 x 5 + 0.92 x 7 = 41.3

Wie wird die Masse M aus der molaren Masse N eines Oligos berechnet?

In unserem Ecom System steht Ihnen ein kostenfreies Online-Tool (MOPS) zur einfachen Berechnung von zur Verfügung. Ansonsten kann folgende Formel verwendet werden:

M[µg] = N x MW / 1000
MW = Molekulargewicht


Beispiel:
Sequenz: GAA ATG AGT GCT CAT CAC TAC TTC CGC (27mer)

nA=7; nC=8; nG=5; nT=7
MW (berechnet) = 8219 g/mol
N= 41.3 nmol

M[µg] = 41.3 x 8219 / 1000 = 339

Wie wird das Molekulargewicht MW eines Oligos berechnet?

In unserem Ecom System steht Ihnen ein kostenfreies Online-Tool (MOPS) zur einfachen Berechnung zur Verfügung. Ansonsten kann folgende Formel verwendet werden:

MW [g/mol]= 249.23 x nA + 240.21 x nT + 265.23 x nG + 225.20 x nC + 63.98 x (s-1) + 2.02

n = Anzahl des Nukleosids X
s = Menge aller Nukleoside der Sequenz


Beispiel:
Sequenz: GAA ATG AGT GCT CAT CAC TAC TTC CGC (27mer)

nA=7; nC=8; nG=5; nT=7

MW [g/mol]= 249.23 x 7 + 240.21 x 7 + 265.23 x 5 + 225.20 x 8+ 63.98 x (s-1) + 2.02 = 8219.33

Wie wird die Schmelztemperatur TM eines Oligos berechnet?

Die Schmelztemperatur TM charakterisiert die Stabilität eines DNA-Hybrids, das von einem Oligo und seinem komplementären Strang gebildet wird.
Bei TM 50% bindet ein Oligo an seinem komplementären Strang.

In unserem Ecom System steht Ihnen ein kostenfreies Online-Tool (MOPS) zur einfachen Berechnung zur Verfügung.

Ansonsten können folgende Formeln verwendet werden:

Sequenz < 15 Basen
TM [°C] = 2(nA + nT) + 4(nG + nC)

Sequenz > 15 Basen
TM [°C] = 69.3 + [41(nG + nC) / s – (650 / s)]

n = Anzahl des Nukleosids X
s = Menge aller Nukleoside der Sequenz


Beispiel:

 Sequenz: GAA ATG AGT GCT CAT CAC TAC TTC CGC (27mer)
nA=7; nC=8; nG=5; nT=7 s= 27

Sequenz < 15 Basen
TM [°C] = 2(7 + 7) + 4(5 + 8) = 80.0

Sequenz > 15 Basen
TM [°C] = 69.3 + [41(5 + 8) / 27] – (650 / 27) = 69.3 + 19.7 – 24.0 = 65.0

Wie wird die Annealing-Temperatur TA eines Oligos berechnet?

Für PCR TA [°C] = [(TM1 + TM2) / 2] – 3

Für Sequenzierung TA [°C] = TM + 3

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